La síntesi d'àcid nucleic es realitza mitjançant el mètode de triglicèrids d'amida siàlica en fase sòlida, mitjançant el qual l'extrem 3' de l'ADN s'immobilitza sobre un substrat en fase sòlida i s'afegeixen nucleòtids en la direcció 3' a 5' fins que es sintetitza el fragment d'ADN desitjat. .Això es diferencia de la síntesi d'ADN per l'aplicació de l'ADN polimerasa.
L'extrem 3' de la primera base s'immobilitza a CPG durant la síntesi, el 5'-OH de la següent base es protegeix amb di-p-tolil tritil DMT, el grup amino de la base està protegit amb àcid benzoic i el 3' L'OH s'activa després amb un compost aminofosfat.1 base del 5 5′-OH d'1 base i 3′-OH de la següent base formen un triglicèrid de fosfit, que després s'oxida amb iode a un triglicèrid de fosfat, el protector de la segona base 5′-OH s'elimina mitjançant l'addició d'àcid dicloroacètic DM fa cicles mitjançant l'addició de la següent base, i després de la síntesi s'elimina el protector del 5′-OH amb un àcid feble. El fragment es desconnecta de la resina sòlida amb hidròxid d'amoni concentrat, el protector s'elimina de la base. amb hidròxid d'amoni concentrat en escalfament, l'hidròxid d'amoni s'elimina, el fragment s'asseca al buit i l'àcid nucleic es purifica per cromatografia líquida o PAGE.
Etapes de la síntesi d'oligo
Desbloqueig
ElEl grup protector de DMT 5 extrem s'elimina afegint una solució de TCA.
Activació
Barrejar l'activador amb el monòmer oligonucleòtid per formar l'intermedi monòmer oligonucleòtid actiu.
Acoblament
El grup hidroxil de 5 terminals reacciona amb l'oligonucleòtid intermedi actiu en una reacció de condensació anti-generativa per formar un enllaç triglicèrid fosfit inestable.
Tapat
L'addició d'un agent de tapament realitza una reacció de tapament d'acetilació amb un excés de grups hidroxil que no estan implicats en la reacció de condensació.
Oxidació
L'addició de solució de iode que conté aigua reacciona amb enllaços fosfits inestables per oxidació per formar enllaços triglicèrids estables d'àcid fosfòric.
Escissió de cianoetil
El producte d'àcid nucleic després de la síntesi, amb l'addició de solució DEA per eliminar el grup cianoetil de l'enllaç triglicèrid fosfat.
Escisat i desprotecció
Els fragments d'àcid nucleic es separen del portador en fase sòlida afegint una solució concentrada d'hidròxid d'amoni i després s'escalfen per eliminar els grups protectors dels enllaços d'hidrogen de les bases.
Hora de publicació: 21-nov-2022