Principi bàsic de la síntesi d'ADN

La síntesi química d'ADN es basa en l'estratègia de síntesi en fase sòlida i la química de fosforamidita.A diferència de la síntesi biològica d'ADN, el material en la síntesi química d'ADN és DMT (4, 4-dimetoxitritil) i desoxirriboxisid modificat amb fosforamidita, tal com es mostra a la figura 1. La síntesi d'ADN es realitza sobre el suport sòlid (podem oferir diversos deColumna de síntesi d'oligo), és a dir, CPG (vidre de porus controlats) i PS (poliestirè), i tota la síntesi es realitza en unSintetitzador d'ADN/ARN, que és el nostre equip principal, té diferents models com ara: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 i etc., la direcció de síntesi és de 3' a 5', i s'introdueix un nucleòtid al suport sòlid mitjançant un cicle de síntesi.Un cicle de síntesi típic conté quatre passos, desprotecció, acoblament, tapat i oxidació (figura 2).La desprotecció està configurada per eliminar el grup DMT del suport sòlid o el grup hidroxil 5' del nucleòsid anterior, l'àcid tricloroacètic al 3% en diclorometà s'utilitza com a reactiu de desprotecció.A continuació, es va deixar que el desoxirriboxiside modificat amb fosforamidita exposés el grup hidroxil amb l'ajuda d'un activador, és a dir, 5-etiltiotetrazol o 4,5-dicianoimidazol, formant el fosfitetrièster (III), i es va realitzar l'etapa d'acoblament.Es porta a terme un pas de capping per bloquejar el grup hidroxil no reaccionat durant l'etapa d'acoblament, per minimitzar la formació de seqüències de defectes no desitjades.Finalment, el fosfittrièster inestable (III) s'oxida a fosfortrièster químic estable (V) amb iode com a oxidant en el present de piridina.

L'ADN sintetitzat es podria escindir del suport sòlid per aminòlisi, el grup protegit 2-cianoetil del fosfortrièster i l'amida de la nucleobase es divideix al mateix temps, les plaques de síntesi i les columnes de síntesi dels bastidors es col·loquen directament a la cambra de reacció. delEquips de desprotecció.L'ADN brut es podria preparar mitjançant HPLC, electroforesi i OPC sota demanda, també us podem proporcionarEquips de purificacióper al postprocessament.