En la síntesi típica d'ADN, ARN i àcids nucleics no naturals, l'etapa de desprotecció i acoblament té un paper crucial.
El pas de desprotecció és eliminar el grup DMT del suport sòlid o el grup hidroxil 5' del nucleòsid anterior amb àcid orgànic i exposar el grup hidroxil per al següent pas d'acoblament.L'àcid tricloroacètic al 3% en diclorometà o toluè s'utilitza principalment per dur a terme l'etapa de desprotecció.La concentració d'àcid tricloroacètic i el temps de desprotecció (temps de desbloqueig) dominen la puresa dels productes finals.La baixa concentració i el temps de desbloqueig insuficient deixen el grup DMT sense reaccionar, que disminueixen el rendiment i augmenten les impureses no desitjades.El llarg temps de desbloqueig pot conduir a la depurina de seqüències sintetitzades, formant les impureses inesperades.
L'etapa d'acoblament és sensible al contingut d'aigua dels dissolvents i a la humitat de l'aire.La concentració d'aigua en la síntesi ha de ser inferior a 40 ppm, millor que menys de 25 ppm.Per mantenir la condició de síntesi anhidra, la síntesi dels àcids nucleics s'ha de dur a terme en un ambient de baixa humitat, per la qual cosa recomanem al nostre client que utilitzi elEquips dissolts d'amidites, que pot dissoldre la fosforamidita en pols o oliosa en acetonitril anhidre per evitar el contacte amb l'aire.
Atès que la dissolució de fosforamidites és millor en la situació no hídrica i les trampes moleculars per adsorbir l'aigua traça als reactius i l'amidita, cal preparar elTrampes moleculars.Recomanem un tamís de 2 g per a ampolles de reactius de 50 a 250 ml, 5 g per a ampolles de reactius de 250 a 500 ml, 10 g per a ampolles de reactius de 500 a 1000 ml i 20 g per a ampolles de reactius de 1000 a 2000 ml.
La dissolució de fosforamidites s'ha de dur a terme sota l'atmosfera inert i la substitució dels reactius activadors i l'acetonitril s'ha d'acabar a temps.Els reactius de tapat i oxidació s'han d'utilitzar tan aviat com sigui possible, els reactius oberts donen menys vida útil i menys activitat durant la síntesi.
Hora de publicació: 09-agost-2022